Análise do papel de Miro-1 sobre a toxicidade da alfa-sinucleína em modelo celular da doença de Parkinson (2022)
- Authors:
- USP affiliated author: ANDREIS, THAÍS ALEXANDRE FALKEMBACH - FCF
- School: FCF
- Subjects: DOENÇA DE PARKINSON; MITOCÔNDRIAS; INFLAMAÇÃO
- Keywords: Miro-1; alfa- sinucleína
- Language: Português
- Abstract: Introdução: A alfa-sinucleína é responsável pela maturação e liberação de vesículas pré-sinápticas. Mutações, como a A30P e a A53T, podem ser bastante prejudiciais à viabilidade celular. Uma das principais características da doença de Parkinson é a presença de agregados proteicos de alfa-sinucleína, conhecidos como corpos de Lewy. A proteína Miro-1 tem papel essencial no transporte mitocondrial anterógrado e retrógrado e na mitofagia mediada por PINK1/Parkina. Experimentos do nosso grupo de pesquisa observaram que a deleção de Miro-1 parece proteger da morte leveduras que expressam alfa-sinucleína exógena. Desta forma, é relevante avaliar a influência do silenciamento de Miro-1 na superexpressão de alfa-sinucleína, tanto na perspectiva da viabilidade celular e estresse do retículo endoplasmático, quanto na possível ativação da resposta pró- inflamatória. Objetivo: O objetivo do presente estudo é estabelecer a relação entre os níveis da proteína Miro-1 e a toxicidade promovida pela superexpressão da alfa-sinucleína. Para isso, avaliou-se os efeitos da diminuição da expressão de Miro-1 em neurônios que expressam alfa-sinucleína selvagem (WT) e mutante (A30P e A53T) em relação à morte celular, estresse do retículo endoplasmático, mitofagia e resposta inflamatória. Materiais e métodos: Células SH-SY5Y foram diferenciadas em neurônios dopaminérgicos e transfectadas com plasmídeos de alfa-sinucleína selvagem e mutante (A30P e A53T), além da utilização da tecnologia CRISPR/Cas9 para redução da expressão de Miro-1. A fim de se estudar a viabilidade celular, foram realizados ensaio de MTT e de calceína AM. Por meio do Western Blot, foram possíveis análises de proteínas como caspase3, XBP-1, CHOP, Bip e ATF6. As células THP-1 foram utilizadas para avaliação da inflamação, juntamente com as técnicas dequantificação de óxido nítrico e ELISA para TNF-α. Para a análise estatística, os resultados foram avaliados por análise de variância (ANOVA), adotando o nível de significância de 5% (p≤0,05). Resultados: É possível afirmar que a superexpressão de alfa-sinucleína na forma selvagem e mutante, principalmente A53T, afeta a viabilidade celular. No entanto, o silenciamento da Miro-1 parece proteger as células do estresse e da consequente morte celular, como pode-se observar nas marcações de Western Blot e no ensaio de MTT e de calceína AM. O aumento na resposta UPR dos grupos CRISPR + A30P e CRISPR + A53T pode estar relacionado com o papel essencial que a Miro- 1 tem para a célula e o estresse gerado por seu silenciamento. Este aumento pode estar associado também à fase inicial dos efeitos da expressão de alfa-sinucleína mutante em que há uma regulação compensatória das chaperonas envolvidas no correto enovelamento e encaminhamento das proteínas. Além disso, foi possível observar que a diminuição de Miro-1 também sugere uma redução na resposta pró- inflamatória no SNC, protegendo as células da toxicidade gerada pela neuroinflamação crônica, presente em pacientes da doença de Parkinson. Conclusão: Os resultados apontam para a confirmação da hipótese de que o silenciamento da proteína Miro-1, quando há superexpressão da alfa-sinucleína, é capaz de proteger a célula do estresse do retículo endoplasmático, da ativação do sistema UPR, da neuroinflamação e, posteriormente, da apoptose
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ABNT
ANDREIS, Thaís Alexandre Falkembach. Análise do papel de Miro-1 sobre a toxicidade da alfa-sinucleína em modelo celular da doença de Parkinson. 2022. Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação) – Faculdade de Ciências Farmacêuticas, Universidade de São Paulo, São Paulo, 2022. Disponível em: https://bdta.abcd.usp.br/directbitstream/232725ea-d2c0-4621-b267-37f32bd4b439/3138067.pdf. Acesso em: 28 abr. 2024. -
APA
Andreis, T. A. F. (2022). Análise do papel de Miro-1 sobre a toxicidade da alfa-sinucleína em modelo celular da doença de Parkinson (Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação). Faculdade de Ciências Farmacêuticas, Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de https://bdta.abcd.usp.br/directbitstream/232725ea-d2c0-4621-b267-37f32bd4b439/3138067.pdf -
NLM
Andreis TAF. Análise do papel de Miro-1 sobre a toxicidade da alfa-sinucleína em modelo celular da doença de Parkinson [Internet]. 2022 ;[citado 2024 abr. 28 ] Available from: https://bdta.abcd.usp.br/directbitstream/232725ea-d2c0-4621-b267-37f32bd4b439/3138067.pdf -
Vancouver
Andreis TAF. Análise do papel de Miro-1 sobre a toxicidade da alfa-sinucleína em modelo celular da doença de Parkinson [Internet]. 2022 ;[citado 2024 abr. 28 ] Available from: https://bdta.abcd.usp.br/directbitstream/232725ea-d2c0-4621-b267-37f32bd4b439/3138067.pdf
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