Avaliação da expressão de proteínas de Chikungunya em células S2 (Drosophila melanogaster) (2019)
- Authors:
- USP affiliated author: OLIVEIRA, FERNANDA SANTOS DE - FMRP
- School: FMRP
- Subjects: VÍRUS CHIKUNGUNYA; VACINAS VIRAIS; CULTURA DE CÉLULAS; ANTÍGENOS DE VÍRUS
- Keywords: Células S2; Alphavirus; S2 cells
- Language: Português
- Abstract: O vírus Chikungunya (CHIKV, Togaviridae, Alphavirus) foi introduzido no território brasileiro a partir de 2014 e desde então vem causando surtos epidêmicos em vários estados como Roraima, Sergipe e Rio de Janeiro. O combate ao CHIKV envolve medidas de controle de seu principal vetor Ae. Albopictus e abordagens selecionadas ao diagnóstico preciso, tratamento e prevenção. Neste último caso, vários candidatos vacinais têm sido propostos incluindo vírus atenuados, inativos, ácidos nucleicos e subunidades. Entre as categorias subunidades e vírus inativos, destacam-se as vacinas de VLP (Virus Like Particles) por combinar a segurança das vacinas de subunidades e o efeito imunogênico das estruturas típicas das vacinas de vírus inativados. O objetivo deste trabalho foi o estudo das melhores condições de cultura de células S2 (Drosophila melanogaster) para a produção de antígenos de CHIKV, sendo potencialmente organizados como VLP. Para isso, foram testadas condições de cultivo em dois meios de cultura distintos: SF900 III suplementado com lipídio e IPL-41 modificado. Ensaios foram realizados em triplicata em frascos Schott com volume final de 20 mL, inóculo inicial de 2x106 células/mL, sob agitação de 100 rpm e a 28ºC. A expressão das proteínas do CHIKV foi induzida em diferentes tempos da cinética de crescimento celular, visando avaliar qual o melhor meio de cultura e tempo de indução da expressão das proteínas. Foi constatada a melhor condição de expressão a partir da indução em 48h de crescimento, utilizando o meio SF900III + CD Lipid, obtendo o maior nível de expressão no tempo 96h. Essa condição foi utilizada para a produção de um volume maior de cultura com aumento de escala de cinco vezes e o mesmo inóculo inicial, objetivando obter maiores quantidades de VLP. Após o cultivo, as VLP foram concentradas e submetidas à ultracentrifugação em gradientede iodixanol, que demonstrou não ser eficiente para separação das VLP em uma única fração. Análises de SDS-PAGE e Western Blotting mostraram que nas frações de ultracentrifugação (1 a 8) são evidentes proteínas de alto peso molecular que foram marcadas pelos anticorpos anti-CHIKV. Apesar de a marcação inespecífica não poder ser descartada, é provável que sejam formas agregadas, ou mesmo imaturas das proteínas que compõem as VLP. Na fração 9 houve uma concentração grande das proteínas específicas de CHIKV, nos tamanhos esperados, mas ainda foram encontradas as proteínas de alto peso molecular, evidenciando que o processo de purificação por gradiente ainda não foi satisfatório e deverá ser melhorado. Os resultados de maneira geral permitiram a definição do melhor meio, tempo de indução e coleta do produto, bem como a caracterização da presença das proteínas de CHIKV com provável organização em forma de VLP
- Imprenta:
- Place of publication: Ribeirão Preto
- Date published: 2019
-
ABNT
OLIVEIRA, Fernanda Santos de. Avaliação da expressão de proteínas de Chikungunya em células S2 (Drosophila melanogaster). 2019. Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação) – Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2019. Disponível em: https://bdta.abcd.usp.br/directbitstream/20022ae0-5095-4ac5-8cb9-9396e0f0f65e/FERNANDA%20SANTOS%20DE%20OLIVEIRA%20-%20Avalia%C3%A7%C3%A3o%20da%20express%C3%A3o%20de%20prote%C3%ADnas%20de%20Chikungunya.pdf. Acesso em: 08 maio 2024. -
APA
Oliveira, F. S. de. (2019). Avaliação da expressão de proteínas de Chikungunya em células S2 (Drosophila melanogaster) (Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação). Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de https://bdta.abcd.usp.br/directbitstream/20022ae0-5095-4ac5-8cb9-9396e0f0f65e/FERNANDA%20SANTOS%20DE%20OLIVEIRA%20-%20Avalia%C3%A7%C3%A3o%20da%20express%C3%A3o%20de%20prote%C3%ADnas%20de%20Chikungunya.pdf -
NLM
Oliveira FS de. Avaliação da expressão de proteínas de Chikungunya em células S2 (Drosophila melanogaster) [Internet]. 2019 ;[citado 2024 maio 08 ] Available from: https://bdta.abcd.usp.br/directbitstream/20022ae0-5095-4ac5-8cb9-9396e0f0f65e/FERNANDA%20SANTOS%20DE%20OLIVEIRA%20-%20Avalia%C3%A7%C3%A3o%20da%20express%C3%A3o%20de%20prote%C3%ADnas%20de%20Chikungunya.pdf -
Vancouver
Oliveira FS de. Avaliação da expressão de proteínas de Chikungunya em células S2 (Drosophila melanogaster) [Internet]. 2019 ;[citado 2024 maio 08 ] Available from: https://bdta.abcd.usp.br/directbitstream/20022ae0-5095-4ac5-8cb9-9396e0f0f65e/FERNANDA%20SANTOS%20DE%20OLIVEIRA%20-%20Avalia%C3%A7%C3%A3o%20da%20express%C3%A3o%20de%20prote%C3%ADnas%20de%20Chikungunya.pdf
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